РЕАКЦИЈА ЛАНЧАНЕ ПОЛИМЕРАЗЕ (ПЦР): ОПИС МЕТОДЕ

Ланчана реакција полимеразе (ПЦР) је стварање вишеструких копија кратког дела људске ДНК. Мала количина физиолошког материјала је неопходна за истраживање и добијање резултата: спутум, крв, амнионска течност, пљувачка, урин итд.

Шта је ланчана реакција полимеразе?

ПЦР метод је развио амерички научник Мелисон, који је 1998. године добио Нобелову награду за свој развој. Активно се користи:

са раном дијагностиком инфекција, онколошким патологијама;
у форензичком прегледу за проучавање изузетно мале количине ДНК;
у ветеринарској медицини, биологији, молекуларној генетици;
за личну идентификацију путем ДНК;
да потврди очинство;
у екологији, на пример, приликом праћења квалитета производа, у антропологији.

Коме је прописан ПЦР?

Ланчана реакција полимеразе у дијагностици инфективних патологија је једна од најпоузданијих метода која даје најпрецизнију и поузданију анализу. На пример, поузданост анализе на хламидију је близу 100%. Најчешће се ова дијагностичка мера прописује пацијентима који током теста имају потешкоћа да идентификују одређени патоген.

ПЦР лабораторијски тестови користе:

У потрази за патогеним организмима који узрокују инфекцију уринарног и гениталног тракта, тешко је идентификовати када се користе усеви или методе имунологије.
За поновну анализу ХИВ-а у почетној фази са позитивним, али упитним резултатом почетне анализе, на примјер, код новорођенчади од заражених родитеља.
Успоставити онколошку патологију у раној фази и за индивидуалну корекцију режима лијечења код пацијената.
За рано откривање и потенцијално лечење наследних патологија. Дакле, многи будући родитељи тестирају да ли су носиоци генетских болести. Код деце, овај метод одређује вероватноћу излагања болестима које се наслеђују.

Такође, ова техника се користи:

за откривање феталне патологије у раној трудноћи;
код пацијената прије операције за трансплантацију органа - потребно је одредити компатибилност ткива
да открију опасне патогене у крви донора;
код новорођенчади за откривање скривених инфекција;
да процени резултате антивирусног или антимикробног третмана.

Зашто проћи кроз ову процедуру?

Пошто се ПЦР сматра високо ефикасном дијагностичком методом која даје скоро 100% резултата, ова процедура се користи:

Да бисте потврдили или искључили дијагнозу.
За брзу процену ефикасности третмана.
У многим случајевима, овај метод се сматра јединим могућим начином откривања патологије у развоју, ако су се друге бактериолошке, виролошке технике показале бескорисним.
Вируси који користе ПЦР поступак откривени су одмах након инфекције и прије почетка главних симптома.
Рано откривање микроорганизама ће омогућити брзу обраду.

Поред тога, ПЦР анализа ће вам омогућити да брзо детектујете мали број микроорганизама у живим или мртвим узорцима. Стога се ова техника користи за тражење специфичног патогеног организма, на примјер, бацила туберкулозе.

Поред тога, користи се ПЦР анализа:

да одреди осетљивост ДНК на специфичне врсте антибиотика, што ће омогућити што је могуће брже започињање третмана;
да контролише ширење епидемија;
идентификовати и пратити нове врсте микроба, патогена.

Главни типови ПЦР

Стандардна метода

ПЦР анализа је изведена на основу вишеструког удвостручења специфичног фрагмента ДНА и РНК коришћењем почетних ензима. Захваљујући томе, истраживач добија потребну количину материјала.

ПЦР у реалном времену

У овом типу истраживања, процес идентификације датог фрагмента почиње након проласка кроз сваки циклус. Овакав тип истраживања омогућава добијање информација о броју вируса и микроорганизама у организму, односно, за квантитативну анализу.

Реверзни начин транскрипције из ПЦР-а

Ова анализа се користи за тражење једноланчане РНК за даљњу детекцију вируса чија је генетичка база названа РНК. На пример, ово је вирус хепатитиса Ц, имунодефицијенција, и тако даље. У спровођењу ове студије, користи се посебан ензим, захваљујући којем се гради једноланчана ДНК. Систем затим враћа други ланац ДНК и изводи традиционалну процедуру.

Индикације за

ПЦР процедура се користи у клиникама инфективних болести, акушерству, урологији, гинекологији и нефрологији, педијатрији и тако даље. Најчешће индикације за анализу задатка су:

да утврди ризик од развоја генетских абнормалности код детета у присуству наследних патологија;
дијагностиковати оба родитеља када планирају трудноћу или када је мајка у тешком стању док носи дијете;
са тешкоћама зачећа да би се идентификовали узроци неплодности;
у случају сумње на сексуалне инфекције у акутној фази или у ризику од њиховог преласка у хроничну фазу;
откривање узрока упалних процеса непознатог порекла;
са незаштићеним повременим сексом;
да одреди осетљивост патогеног микроорганизма на одређени лек;
сумња на латентну инфекцију за откривање патогена без очигледних симптома;
да потврди опоравак од болести, тј. ретроспективну дијагнозу.

Такође, ПЦР се користи када је потребно тачно идентификовати патогене као што су: вируси хепатитиса, хумана имунодефицијенција, цитомегаловирус, херпес симплек вирус, вирус рубеоле, папилома вирус.

Тамо се овај метод користи за одређивање инфекција: инфективна мононуклеоза, крпељни енцефалитис, кандидијаза, која је узрокована гљивицама цандиде, гениталним инфекцијама и туберкулозом.

Ако су контраиндикације и сигурна метода?

Пошто се ова процедура одвија без икаквог утицаја на тело, а користи се само биолошки материјал, који се узима за истраживање, нема контраиндикација због одсуства потенцијалне опасности за тело. На пример, узорковање биоматеријала цервикалног канала материце се не врши након колпоскопије. Достава размаза, сцрапингс је дозвољено само 4-7 дана након завршетка менструације и потпуни престанак исцједка.

Карактеристике припреме за процедуру

Као узорак за ПЦР анализу, у којој се детектује ДНК страног патогена, користи се биолошка течност или ткиво. Унос испитиване супстанце одвија се у облику узорковања крви из вене, стругања из носне шупљине, ларинкса, грлића материце, уретре. Пре дијагностичке процедуре, лекар мора објаснити пацијенту који материјал ће се узети:

у анализи херпесних инфекција, мононуклеоза узима анализу урина, као и размаз од фаринкса;
када се тестира на хепатитис или токсоплазмозу, крв се узима из вене;
у циљу дијагностиковања различитих типова оштећења ЦНС-а, узима се цереброспинална течност;
у пулмонологији, узорци за ПЦР анализу су плеурална течност и спутум;
ако се проведе студија о интраутериној инфекцији током трудноће, амнионска течност, станице плаценте се користе за анализу.

Поузданост и тачност резултата зависи од стерилности и услова узимања биоматеријала. Пошто су ПЦР студије веома осетљиве, свака контаминација узете супстанце може нарушити резултате. Компетентна припрема за испоруку биоматеријала не представља никакву потешкоћу за пацијента.

Али постоји неколико препорука:

при анализи полно преносивих инфекција неопходно је искључити интимне контакте три дана прије испоруке материјала;
72 сата треба да прекине употребу било ког вагиналног препарата;
од вечери претходног дана не може се обавити никаква хигијена испитиваних подручја
3-4 сата пре узимања узорка из мокраћне цеви, треба искључити мокрење;
месец дана пре узимања тестова морате престати узимати антибиотике;
крв се даје ујутро на празан желудац пре јела и пића;
Јутарњи урин се сакупља у стерилној посуди након одласка у тоалет.

Како је ПЦР?

Код извођења истраживања у специјалном реактору, одређени циклус се понавља:

Први корак. Денатурација. Слина, крв, гинеколошки тестови и друге супстанце стављају се у апликатор, где се материјал загрева и ДНК се дели на два ланца.
Други корак. Благо хлађење преузете супстанце, додавање посебних компоненти које препознају неопходне делове молекуле ДТЦ и везују се за њега.
3 степ. Елонгатион Током процеса, фрагмент ДТЦ патогеног организма је завршен, формирана је његова копија. Овај циклус се понавља, што дуплира копију специфичног фрагмента ДНА.

За неколико сати формира се много копија овог фрагмента, открива се њихово присуство у узорцима. Затим се резултати упоређују са базама података различитих типова патогена. То вам омогућава да одредите врсту инфекције.

Значајке анализе декодирања?

Коначни резултат студије дат ће се пацијенту неколико дана након биолошке анализе.

Квалитативна анализа

Негативан резултат у овом случају значи да у флуиду који је био подвргнут тестирању није детектован ниједан инфективни агенс. Позитиван резултат указује на детекцију патогених вируса или бактерија у биолошком узорку. Ако је резултат позитиван, али у исто вријеме особа нема знакова активације инфекције, такво стање тијела назива се асимптоматски здрав носач.

Најчешће се то уочава када се узима биоматеријал у вирусним патологијама. У овом случају, лечење није потребно, али захтева сталан лекарски надзор. Пошто у таквим условима постоји вероватноћа:

ширење вируса са носача на здраве људе;
активирање процеса и прелазак патологије у хроничну форму.

Квантитативна анализа

Квантитативни резултат одређује специјалиста посебно за одређену врсту инфекције. На основу добијених резултата могуће је проценити степен развијености, стадиј патологије, који омогућава да се лечење препише што је брже могуће.